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巨噬細胞炎性蛋白2Elisa試劑盒實驗操作程序簡述

點擊次數:1078 更新時間:2017-06-01

巨噬細胞炎性蛋白2Elisa試劑盒實驗操作程序簡述

  1. 準備試劑,樣品和標準品;
  2. 加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘;
  3. 洗板5次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘;
  4. 洗板5次,加入顯色液A、B,37℃反應10分鐘;
  5. 加入終止液;
  6. 15分鐘之內度OD值;
  7. 計算。
巨噬細胞炎性蛋白2Elisa試劑盒競爭法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
包被的條件
包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時間,包被液的pH等應根據試驗的特點和材料的性質而選定。抗體和蛋白質抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置放置一個晚上,37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化,每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協(xié)調選定。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
巨噬細胞炎性蛋白2Elisa試劑盒抗原和抗體 
制備結合物時所用抗體一般 均為純度較高的IgG,以免在與酶聯結時其他雜蛋白的干擾。用親和層析純的抗體,這樣全部酶結合物均具有特異的免疫活性,可以在高稀釋度進行反應,實驗結果本底淺淡。如用F(ab')2進行標記,則更可避免標本中RF的干擾。在ELISA試劑盒現貨中用酶標抗原的模式不多,總的要求是抗原必須是高純度的。

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